Икона была принесена донскими казаками, прибывшими на помощь к великому князю Дмитрию Ивановичу Донскому в битве с татарами. Она была утверждена на древке, как хоругвь, и все время оставалась при русском войске.

В день Куликовской битвы в 1380 году, икону носили среди православных воинов , для ободрения и помощи им против татар, Литвы и Рязани. Когда неприятели были побеждены, казаки поднесли икону в дар великому князю Дмитрию, который привез ее в Москву и поставил сначала в Успенском соборе, а после постройки Благовещенского собора перенес ее туда.

В 1591 году крымский хан Казы-Гирей с многочисленным войском татар подступил к Москве. Царь Федор Иоаннович, не надеясь отразить своими силами внезапное нашествие татар, так как еще должен был защищаться от шведов, шедших на Новгород, обратился с молитвой к Богородице. Он приказал с иконой Донской Богоматери и другими иконами совершить крестный ход вокруг города и потом поставить ее в походной своей церкви среди воинских рядов. Целую ночь царь молился, прося Пресвятую Богородицу послать помощь в борьбе с врагами, и получил ведение, что одержит победу над татарами. Утром вражеские войска с ожесточением вступили в бой, который продолжался почти сутки, но вдруг враг был устрашен невидимой силой и обратился в бегство, оставив на поле сражения убитых, раненых и весь свой стан.

В том же 1591 году был основан Донской монастырь на том месте, где среди воинов во время битвы стояла Донская икона. В монастырской церкви была поставлена чудотворная икона, и установлен 19 августа/l сентября ежегодный праздник в честь этой иконы Божьей Матери, п память бывшей чудесной помощи от нее русскому войску» с крестным ходом из Успенского собора в Донской монастырь.